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關于熒光濾光片,這篇文章總結(jié)的很到位了
點擊次數(shù):1505 更新時間:2023-02-09
熒光濾光片的典型特征是截止深度深,自發(fā)熒光小,而且要求透射面形好,利于熒光成像的提取。所以較好的熒光濾光片采用單片無色透明的玻璃作為基底,在玻璃的兩個表面鍍膜。相比常規(guī)的用多片膠合或顏色玻璃輔助截止的熒光濾光片,單片式在熒光成像上有明顯優(yōu)勢,但由于單片式的熒光濾光片的制作難度很高,所以成本較高。
熒光濾光片組由以下部件組成:
·激發(fā)濾光片,限制激發(fā)光的波長范圍;
·二向色鏡分色片,將激發(fā)光反射到樣品,并將較長波長的發(fā)射光傳輸?shù)教綔y器;
·發(fā)射濾光片,將發(fā)射熒光的有限波長范圍傳遞到探測器。
在熒光濾光片組中,激發(fā)通帶位于熒光團的激發(fā)光譜之上,而發(fā)射通帶位于熒光團的發(fā)射光譜之上。設置兩個通帶以獲得更佳結(jié)果的能力取決于斯托克斯位移,即熒光團的峰值激發(fā)波長和峰值發(fā)射波長之間的納米間隔。許多流行的熒光探針具有較小的斯托克斯位移,小于其波長的3%。盡管這些探針的激發(fā)和發(fā)射通帶通常會放在一起,相反,短斯托克斯-位移熒光團的更典型的模式,長波長激發(fā)通帶邊緣和短波長發(fā)射通帶邊緣之間的所謂間隙相對于熒光團的交叉點非常不對稱,在該交叉點,歸一化的激發(fā)和發(fā)射曲線交叉。
這種不對稱性將發(fā)射濾光片通帶向外推到更長的波長,結(jié)果是發(fā)射濾光片捕獲的發(fā)射光更少,濾光片組性能降低。由于兩個原因,間隙很難減?。?1)減小的間隙導致較高水平的激發(fā)光通過,即從樣品平面反射到發(fā)射濾光片中的激發(fā)光;(2)制造可變性限制了我們將兩個光譜邊緣放置在狹窄間隙中的能力,而不會冒著兩個濾光片邊緣在較深OD處發(fā)生交叉的風險。